Microbiology Laboratory Turkey

Mikrobiyoloji Ile Ilgili Tüm Konuların Kısa ve Öz Anlatımları. Microbiology Lab Information.

Bu Blogda Ara(SEARCH)

MicroLab

identifikasyon etiketine sahip kayıtlar gösteriliyor. Tüm kayıtları göster
identifikasyon etiketine sahip kayıtlar gösteriliyor. Tüm kayıtları göster

19 Şubat 2019 Salı

Şubat 19, 2019

Aglütinasyon Testi

Aglütinasyon Testi

Kültürlerde, bir bakterinin Salmonella veya Shigella türlerinden biri olarak karar verilmesi için mutlaka lam aglütinasyonu yapılması gerekir. Ayrıca, Escherichia coli’nin serotipleri de (Serotip, özellikle bakteri ve virüslerde, antijen karakterleri ile belirlenen türün alt tür kümesidir.) ancak, lam aglütinasyonu yapılarak tespit edilir. Lam aglütinasyonu aynı zamanda bir serolojik doğrulama testidir. 

Testin Yapılış Tekniği; 
  • Öncelikle bakteri süspansiyonu hazırlanır; bir tüpe konulan birkaç damla tuzlu suya, katı besiyerinde oluşmuş kolonilerden özeyle birkaç tane alınıp ezilerek süt görünümünde karışım oluşturulur. 
  • Kullanılacak antiserumlar, 1/5 ya da 1/10 oranında sulandırılarak kullanılır. (Antiserum; enfeksiyon yapıcı mikroorganizmalara ya da zehirli maddelere karşı etkili özgül antikorları içeren kan serumudur.)
  • Temiz bir lam alınır. Pastör pipetiyle lamın bir ucuna bir damla serum fizyolojik, diğer ucuna bir damla antiserum damlatılır. 
  • Her iki damla üzerine, ince bir pastör pipetiyle bakteri süspansiyonundan birer damla damlatılır. 
  • Lam elle tutulup eğdirilerek bir dakika beklenir.
  • Sonuç, siyah zemin üzerine tutularak değerlendirilir. Kümeleşerek parçacıkların oluşması, aglütinasyonun olumlu sonuçlandığını gösterir.

INSTAGRAM

0
By on Hiç yorum yok:
Etiketler: , , , , , , , , , , , , , ,

22 Ekim 2018 Pazartesi

Ekim 22, 2018

ROSE BENGAL TESTİ (TÜRKÇE)

ROSE BENGAL TESTİ 

Brucella abortus'un tanısını koymaktır.
Araç Gereçler
  • Antijen (Rose bengal boyası ile özel teknikle boyanan, Brucella abortus bakterilerinin tamponlu tuzlu sudaki standart süspansiyonlarıdır.) 
  • 1,5 cm çapında yayvan çukurlar bulunan plaklar  
  • Hasta serumu 
  • Kürdan 

Teknik 
➤ Plak çukurlarından birine, 0.03 ml hasta serumu konur. 
➤ Hasta serumunun üstüne 0,03 ml iyice karıştırılmış antijen konur
➤ Bir kürdanla iyice karıştırılarak 1,5 cm çaplı bir alana yayılır. 
➤ Elde ya da bir rotatorda dairevi hareketler yaparak 4 dakika çevrilir. 
➤ Süre sonunda sonuçlar okunur.

Testin Değerlendirilmesi 
➤ Sonuçta iri tanecikli çökeltiler (aglütinasyon) oluşmuşsa; pozitif, 
➤ İnce tanecikli çökelti oluşmuşsa; kuşkulu,  
➤ Homojen görüntü oluşmuşsa; negatif olarak değerlendirilir. 
INSTAGRAM
FACEBOOK 
TWITTER

0
By on Hiç yorum yok:
Etiketler: , , , , , , , , , , , , , ,

13 Ekim 2018 Cumartesi

Ekim 13, 2018

OKSİDAZ TESTİ

OKSİDAZ TESTİ

Sitokrom oksidaz, bazı bakteriler tarafından sentezlenen bir enzimdir. Oksidaz testi bu enzimin aktivitesini ölçmeye yarayan bir testtir. Sitokrom oksidaz, fenilendiamin bileşiklerini okside ederek koyu mavi renkli indofenole dönüştürür. Neisseria ve Pseudomonas türlerinde oksidaz pozitif, Enterobacteriaceae türlerinde negatiftir.

Testin Yapılış Tekniği;
➤ Steril bir petri kutusu içine yerleştirilmiş kurutma kağıdına 2-3 damla oksidaz
ayıracı (dimetil veya tetrametil fenilendiamin dihidroklorid) damlatılır.
➤ Üzerine, öze ile şüpheli koloniden bir miktar alınarak sürülür.
➤ 10-60 saniye içinde koyu mavi renk oluşması, testin pozitif olduğunu gösterir.
  
INSTAGRAM
FACEBOOK 
TWITTER

0
By on Hiç yorum yok:
Etiketler: , , , , , , , , , , , , , , ,
Ekim 13, 2018

OXIDASE TEST

OXIDASE TEST PROCEDURE

Oxidase Test
Many organisms that respire have the cytochrome C oxidase enzymes in their electron transport chain that transfers electrons to oxygen, reducing oxygen to either water or hydrogen peroxide.  (If the toxic hydrogen peroxide is generated, catalase will convert the hydrogen peroxide to water and oxygen.)  The tests described here use Kovac's  oxidase reagent (tetramethyl-p-phenylenediamine dihydrochloride) that changes color when it becomes oxidized by cytochrome C oxidase.  As this enzyme requires oxygen, it is present only in aerobes, a few microaerophiles, and facultative anaerobes.  Because all known strains that are oxidase positive are catalase positive (either +i or +s), but not all catalase positive strains are oxidase positive, these two tests together may really help narrow down the identification of an unknown.
➤ This test can be performed using one of two similar procedures, your instructor will inform you of which.

Purpose: 
to test for the presence of cytochrome oxidase.  This test is helpful in identifying members of Neisseria, Enterobacteriaceae, Pseudomonadaceae, to aid in differentiating Gram negative nonenterics from Enterobacteriaceae, and in identifying a few others.

 Colonial Growth Procedure:
➤ Have freshly grown growth in streaks, lines, or colonies on a solid media, such as Nutrient Agar or TSA.  Do not use blood agar plates as blood cells contain oxidase and may give a false positive reading.
➤ Watch the time closely.  Directly place two or three drops of the reagent onto some growth.
➤ Within 20 seconds, observe if the growth under the reagent turns blue.
➤ If the color changes blue within 20 seconds, record the test as positive for the presence of cytochrome C oxidase.
➤ Keep watching for a color change to blue within 30 seconds.  If the color changes to blue within 30 seconds, record the test as potentially positive or inconclusive.  If the color does not change to blue within 30 seconds, record your results as negative for the presence of cytochrome C oxidase.  Important, the reagent may oxidize on its own and turn blue, so a color change after 30 seconds is negative.
➤ Compare your results with both a positive and a negative control.

Oxidase Slide Procedure:
➧This procedure requires BBL's DrySlide TM from Becton Dickinson and Company.  These slides already have the reagent on them.
➧Use freshly grown growth or colonies from a solid media that is not blood agar, such as Nutrient Agar or TSA.  Old growth is not reliable.
➧Transfer a large colony or equivalent amount of cells to the reagent slides using a tool that is not metal. Sterile pipettes and the wooden handles of swab sticks are suggested.  Some use cotton swabs to transfer the cells, but too many cells often stay with the swab, so this is not recommended.  If you are unable to pick up a large colony of cells, an agar plug may be cut out of a spare plate of cells with cleaned instruments, remove and invert the plug with cleaned forceps, and place the cells on the plug directly on the BBL's DrySlide TM.  Do not allow the forceps to touch the slide.  (This procedure works well but will likely contaminate the plate, so make sure it is a spare plate.) 
➧Observe the slides for a color change to blue watching the time closely.
➧If the color changes to blue within 20 seconds, record the test as positive for the presence of cytochrome C oxidase.  If the color becomes blue within 30 seconds, record the test as probably positive.
➧If the color does not change to blue within 30 seconds, record the test as negative for the presence of cytochrome C oxidase.
➧Compare your results with both a positive and a negative control.  Note, many specimens will turn blue after 30 seconds from a side reaction, a few as early as 45 seconds, so watch the time closely and record these as negative.

Instructor Notes:
The reagent can oxidize (go bad) and should be tested with a known positive control.  If the reagent looks bad, do not use unless known controls test correctly.  Escherichia coli is oxidase negative and Bacillus subtilis, Alcaligenes faecalis, and the Pseudomonas species are all positive.  With the DrySlides, some known positive controls may not turn blue within 20 seconds (BD BBL's DrySlide TM Oxidase Product Insert, 2013) but usually do within 30 seconds.  The Colonial Growth procedure does seem to work better than the Slide procedure if fresh reagents and fresh cultures are used.  Not only is the Colonial Growth procedure easier to visibly observe than the Slide procedure, but the color change also occurs earlier and further away from the cutoff time.  Collin et al., 1989, say that a clean platinum wire may be used, but determining a clean from a mostly clean wire and a platinum from non-platinum wire may be too difficult for most students so that metal instruments are not recommended.  A trace of iron in a metal instrument that touches the reagent slide may result in a false positive result.  The oxidase test should not be performed on cells that have been grown in a medium containing glucose as glucose fermentation inhibits oxidase.  There are also other oxidase tests that use other reagents, but they are less sensitive than the test and reagent discussed here.


INSTAGRAM

FACEBOOK 

TWITTER

1
By on 1 yorum:
Etiketler: , , , , , , , , , , , , , ,

4 Ekim 2018 Perşembe

Ekim 04, 2018

TRIPLE SUGAR IRON (TSI AGAR) (ENGLISH)

TRIPLE SUGAR IRON (TSI AGAR)

Triple sugar iron agar (TSI) is a differential medium that contains lactose, sucrose, a small amount of glucose (dextrose), ferrous sulfate, and the pH indicator phenol red.  It is used to differentiate enterics based on the ability to reduce sulfur and ferment carbohydrates. 

As with the phenol red fermentation broths, if an organism can ferment any of the three sugars present in the medium, the medium will turn yellow.  If an organism can only ferment dextrose, the small amount of dextrose in the medium is used by the organism within the first ten hours of incubation. After that time, the reaction that produced acid reverts in the aerobic areas of the slant, and the medium in those areas turns red, indicating alkaline conditions. The anaerobic areas of the slant, such as the butt, will not revert to an alkaline state, and they will remain yellow. This happens with Salmonella and Shigella. 




Procedure:

  1. Touch a well isolated colony with a sterile straight wire.
  2. Inoculate TSI by first stabbing through the centre of the medium to the bottom of the tube and then streak the surface of the slant.
  3. Leave the cap loose and incubate the tube at 35 in ambient air for 18 to 24 hours.
  4. Observe the reaction


INSTAGRAM
https://www.instagram.com/microbiologylab_turkey/

FACEBOOK
https://www.facebook.com/mikrobiyolojilab/



0
By on Hiç yorum yok:
Etiketler: , , , , , , , , , , , , , , , ,
Ekim 04, 2018

TRIPLE SUGAR IRON (TSI AGAR)

TRIPLE SUGAR IRON (TSI AGAR)

Glikoz, laktoz ve sükroz olarak bakılır. Yatık TSI besiyerine inoküle edilen suş 37°C’ da 24 saat inkübe edilir. İnkübasyon sonunda tüpün dibindeki sarıya dönen renk değişimi glikozun kullanıldığını, yatık yüzeydeki sarıya dönen renk değişimi laktozun kullanıldığını, yatık yüzeyin ucundaki sarıya dönen renk değişimi sukrozun kullanıldığını gösterir. Ayrıca (Norveç üçlü tüp metodunda kullanılan ikinci besiyerine) mannitol’ e geçilerek 37°C’ da 24 saat inkübasyondan sonra sarıya dönen renk değişimi ile mannitol fermantasyonu saptanır.



Testin yapılış tekniği; 
➤ Katı besiyerinde üremiş olan kolonilerden hangi bakteri olduğu tahmin edilenler, TSI agara ekilir. 
➤ Etüvde, 37oC’de 24 saat inkübe edilir.
➤ İnkübasyon sonucunda üreyen kolonilerin gözlenmesi durumuna göre değişen rengin hangi bakteri olup olmadığına karar verilir.


INSTAGRAM
https://www.instagram.com/microbiologylab_turkey/

FACEBOOK
https://www.facebook.com/mikrobiyolojilab/


0
By on Hiç yorum yok:
Etiketler: , , , , , , , , , , , , , , ,